動物源性DNA檢測試劑盒是為專業(yè)的高通量實驗室設計的,但是現(xiàn)在這種試劑盒是適合中低等通量的實驗室使用,這個試劑盒專門為每天需要制備的樣品量達到100個的實驗室而設計。
該試劑盒在連接探針末段引入不同長度的標簽序列,獲得長度各異的目的探針連接產物,利用熒光標記的通用引物對連接產物進行PCR擴增,通過熒光毛細管電泳對擴增產物進行電泳分離檢測,后通過對電泳圖譜的分析獲取各個位點的峰高,進而對樣品目的區(qū)域的拷貝數進行分析。
動物源性DNA檢測試劑盒的滲透壓很低(<20mosm/kgH2O),粘度也很小,可形成高達1.3g/ml密度,采用預先形成的密度梯度時可在低離心力(200~1000g)于數分至數十分鐘內達到滿意的細胞分離結果。由于Percoll擴散常數低,所形成的梯度十分穩(wěn)定。此外,不穿透生物膜,對細胞無毒害,因此廣泛用于分離細胞、亞細胞成分、細菌及病毒,還可將受損細胞及其碎片與完好的活細胞分離。
整個檢測過程應嚴格分在三區(qū)進行:PCR反應體系的配制區(qū);標本處理、加樣區(qū);PCR擴增、熒光檢測及結果分析區(qū)。各區(qū)使用的儀器、設備、耗材和工作服應獨立。實驗后即請清潔工作臺,并進行消毒。
使用不含熒光物質的一次性手套(經常替換)、一次性離心管、自卸式移液器和帶濾嘴吸頭。
每次實驗應設置陰陽性對照品,試劑準備和標本處理應使用超凈工作臺(負壓式)或防污染罩,以防止對環(huán)境污染。
操作人員應經過專業(yè)培訓,具有一定經驗和操作技能。
操作臺、移液器、離心機、PCR擴增儀等儀器設備應經常用10%次氯酸或70%酒精、紫外線燈或臭氧消毒處理。
實驗中用過的吸頭、擴增完畢的離心管、標本和其它廢棄物品一同滅菌后丟棄于地點。
試劑使用前應在室溫下充分融化并混勻。